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预防医学  2019, Vol. 31 Issue (7): 653-657    DOI: 10.19485/j.cnki.issn2096-5087.2019.07.002
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副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究
占利, 徐昌平, 张云怡, 陈鸿鹄, 张政, 陈建才, 张俊彦, 梅玲玲
浙江省疾病预防控制中心,浙江 杭州 310051
Real-time recombinase polymerase amplification for detection of Vibrio parahaemolyticus
ZHAN Li, XU Chang-ping, ZHANG Yun-yi, CHEN Hong-hu, ZHANG Zheng, CHEN Jian-cai, ZHANG Jun-yan, MEI Ling-ling
Zhejiang Provincial Center for Disease Control and Prevention,Hangzhou,Zhejiang 310051,China
全文: PDF(726 KB)  
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 目的 建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA).方法 根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不同种属弧菌及其他细菌标准株评价方法特异度,通过重复试验评价方法稳定性,通过实样检测评价方法应用效果.结果 建立的实时RPA方法在39 ℃恒温下20 min内完成副溶血性弧菌扩增,最低检测限为5 pg/反应,与其他致病菌无交叉反应,不同浓度的副溶血性弧菌DNA模板和大肠杆菌DNA模板隔日3次实时RPA检测结果一致,实时RPA对51份鲜活/冰鲜鱼、虾、贝、蟹类样品的检测结果与GB 4789.7—2013《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》检测结果一致.结论 建立的实时RPA方法可定性检测副溶血性弧菌,且实验操作及结果判读简单,适用于突发公共卫生事件、食品安全监管中的副溶血性弧菌快速检测。
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占利
徐昌平
张云怡
陈鸿鹄
张政
陈建才
张俊彦
梅玲玲
关键词 副溶血性弧菌重组酶聚合酶扩增技术检测tlh基因    
AbstractObjective To establish real-time recombinase polymerase amplification(RPA)for the rapid detection of Vibrio parahaemolyticus(VP).Methods An exo probe and primers were designed according to the conserved sequence of thermolabile hemolysin(tlh)gene of VP and then RPA for detection of VP was established. The sensitivity of the assay was evaluated by detecting different concentration of VP;the specificity was evaluated by detecting different bacteria;the stability was evaluated by repeat trials;the application effect was evaluated by detecting food samples which were simultaneously tested with traditional culture method according to GB 4798.7-2013 Detection of VP.Results A real-time RPA was established to complete VP amplification within 20 min at a constant temperature of 39 ℃. The analytical sensitivity of the assay was five pg per reaction and no cross-reactivity with other pathogenic bacteria observed. The RPA detection results with different concentration of VP and E. coli DNA templates at three time points were consistent. The detection results of 51 food samples by RPA were the same as those by traditional culture method.Conclusion The established real-time RPA can qualitatively detect VP,with simple operation and interpretation of results,which is suitable for rapid detection of VP in public health emergencies and food safety supervision.
Key wordsVibrio parahaemolyticus    Recombinase polymerase amplification    Detection    Thermolabile hemolysin
收稿日期: 2019-02-14      修回日期: 2019-03-15     
中图分类号:  R155.3  
基金资助:浙江省分析测试科技计划项目(2018C37017); 国家科技重大专项(2018ZX10714002)
通信作者: 梅玲玲,E-mail:llmei@cdc.zj.cn   
作者简介: 占利,博士,副主任技师,主要从事微生物检验工作
引用本文:   
占利, 徐昌平, 张云怡, 陈鸿鹄, 张政, 陈建才, 张俊彦, 梅玲玲. 副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究[J]. 预防医学, 2019, 31(7): 653-657.
ZHAN Li, XU Chang-ping, ZHANG Yun-yi, CHEN Hong-hu, ZHANG Zheng, CHEN Jian-cai, ZHANG Jun-yan, MEI Ling-ling. Real-time recombinase polymerase amplification for detection of Vibrio parahaemolyticus. Preventive Medicine, 2019, 31(7): 653-657.
链接本文:  
http://www.zjyfyxzz.com/CN/10.19485/j.cnki.issn2096-5087.2019.07.002      或      http://www.zjyfyxzz.com/CN/Y2019/V31/I7/653
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