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预防医学  2021, Vol. 33 Issue (5): 536-540    DOI: 10.19485/j.cnki.issn2096-5087.2021.05.027
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GⅡ型诺如病毒装甲RNA质控品研制
宋士利, 李明强, 孙亚萍
杭州市余杭区疾病预防控制中心检验科,浙江 杭州 311100
全文: PDF(970 KB)  
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 目的 采用MS2噬菌体装甲RNA技术构建内含GⅡ型诺如病毒RNA的装甲RNA质控品,为诺如病毒核酸检测提供安全稳定的标准品。方法 将MS2噬菌体成熟酶蛋白、包膜蛋白和调节位点基因(PAC基因)及GⅡ型诺如病毒520 bp片段克隆到表达质粒pET30b中,构建重组质粒pET-PAC,pET-PAC转入大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,表达产物纯化后鉴定并进行定量及稳定性分析。结果 研究成功构建和表达了耐RNA酶、内含GⅡ型诺如病毒片段的装甲RNA——AR-GⅡ。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示AR-GⅡ病毒颗粒的蛋白分子量约为14.4 kD,纯化后的AR-GⅡ无宿主菌DNA、RNA等杂质残留,每1 mL LB培养基可诱导约1.5×1012 copies的AR-GⅡ。AR-GⅡ在37 ℃、4 ℃条件下可以稳定8周以上,-20 ℃反复冻融8次RNA病毒浓度也无明显衰减,稳定性良好。结论 基于MS2噬菌体制备的AR-GⅡ拷贝数高,稳定性好且能耐受RNA酶攻击,可以作为标准样品用于监控诺如病毒核酸提取、反转录和扩增等全过程。
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宋士利
李明强
孙亚萍
关键词 GⅡ型诺如病毒MS2噬菌体装甲RNA质控品    
收稿日期: 2020-11-12      修回日期: 2021-02-22      出版日期: 2021-05-10
中图分类号:  R373.2  
通信作者: 宋士利,E-mail:doghull2@163.com   
作者简介: 宋士利,硕士,副主任技师,主要从事微生物检验工作
引用本文:   
宋士利, 李明强, 孙亚萍. GⅡ型诺如病毒装甲RNA质控品研制[J]. 预防医学, 2021, 33(5): 536-540.
链接本文:  
http://www.zjyfyxzz.com/CN/Y2021/V33/I5/536
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